目的 本研究对转多基因库安托杨株系的溃疡病抗病性检测及抗病相关基因的表达分析，为通过基因工程手段培育抗病林木新树种提供有价值的参考。 方法 以转JERF36等多个外源基因的1年生库安托杨株系D5-9、D5-20、D5-21及非转基因受体D5-0为材料，对主干人工接种溃疡病菌的各株系病情指数进行了测定，同时对接种5 d后树皮组织中5个抗病基因的表达情况进行了实时定量PCR（qPCR）分析。 结果 在溃疡病菌胁迫下，3个转基因株系对溃疡病菌的抗性显著优于非转基因受体株系，转基因株系间抗病性也具有一定差异，D5-21的病情指数显著低于其它2个转基因株系；肉桂醇脱氢酶基因在3个转基因株系树皮中表达量均高于对照，类甜蛋白基因仅在D5-19树皮中的表达量高于对照，其他3个基因在转基因株系中的表达量或与对照相当或低于对照。 结论 转多基因库安托杨株系的溃疡病抗性与非转基因对照相比均有显著提高，且转基因株系间差异显著；同时转基因株系中不同抗病基因的表达模式也有很大差异，说明溃疡病菌胁迫下转多基因库安托杨抗病调控的复杂性，其分子调控机制还有待深入研究。

[Objective] In order to study the function of Arabidopsis thaliana methyltransferase gene AtMET1, 17-β-estradiol inducible plant expression vector pER8-MET1 was constructed, and its characters of inducible expression were detected. [Methods] The AtMET1 gene from Arabidopsis thaliana was used as the target gene, and ‘digestion-ligation’ method was applied for constructing the plant expression vector pER8-MET1, which could be induced by 17-β-estradiol. Then the vector was transferred to Agrobacterium tumefaciens LBA4404. The Agrobacterium strain containing pER8-GFP vector was injected into the leaves of Nicotiana tabacum, then the leaves were induced by 17-β-estradiol in different levels of concentrations and time durations. QPCR was performed to detect GFP gene expression, through which the optimum concentration and time duration were screened. The Agrobacterium strain containing pER8-MET1 vector was injected into the leaves of Nicotiana tabacum, then the leaves were induced by optimal concentration of 17-β-estradiol through different time durations. QPCR was performed to detect MET1 gene expression. [Results] The results of qPCR showed that 17-β-estradiol can effectively induce the expression of the target gene in pER8-MET1 and the optimal concentration of 17-β-estradiol is 50 μmol·L-1. The expression level of MET1 gene gradually increased with 17-β-estradiol treating time and reached the highest level at 12h. [Conclusion] The pER8-MET1 vector was successfully constructed. The construction of the plant expression vector pER8-MET1 lays a good foundation for the mechanism study on the relationship between DNA methylation and phenotype variation.

目的 研究拟南芥甲基化转移酶基因 AtMET 1在银腺杨84K（ Populus alba × P. glandulosa ‘84K’）中的诱导表达特性，为建立杨树甲基化诱导变异体系、进而实现杨树品种改良等奠定基础。 方法 以白杨派优良品种84K杨的无菌苗叶片为受体材料，采用农杆菌介导法将化学诱导启动子与AtMET1基因导入84K杨基因组中；经潮霉素筛选获得抗性植株，通过常规PCR检测、DNA测序等方法对抗性植株进行鉴定。通过化学诱导剂17-β-雌二醇对随机挑选的1个转基因株系离体叶片进行诱导处理，处理时间为0、3、6、12、24、48、96、144 h，采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测外源基因AtMET1表达量变化。 结果 本研究共获得了潮霉素抗性芽648个，经生根筛选获得18株抗性植株，经分子检测证实全部为转基因植株，分别标号为AM-1~18#。qRT-PCR结果显示：化学诱导剂17-β-雌二醇处理3 h时，目的基因AtMET1的表达量即达到最大值，随后在处理6 h时表达量下降，处理12 h时有所回升，处理24 h后表达量降低至不足12 h时的一半。 结论 化学诱导剂17-β-雌二醇能迅速有效地调控转基因杨树中AtMET1基因的表达，为进一步研究MET1基因在杨树基因组甲基化调控方面的作用机制奠定基础，也为今后杨树化学诱导表达研究及品种改良提供新思路、新方法。

目的 为探索WOX4b基因在核桃不定根发生过程中的调控作用提供理论支撑。 方法 以核桃品种‘林早香’（Juglans regia ‘Linzaoxiang’）的cDNA为模板克隆该基因CDS全长序列；利用生物信息学技术对其进行多重序列比对和系统进化分析；构建该基因与黄色荧光蛋白（Yellow Fluorescent Protein,YFP）标签的融合表达载体进行亚细胞定位分析；通过对银腺杨‘84K’的遗传转化，分析其功能。 结果 JrWOX4b基因的编码序列（Coding sequence, CDS）长度为678 bp，编码226个氨基酸，分子量为25.42 KDa。所编码氨基酸序列的多重比对及系统进化分析结果显示：核桃JrWOX4b与山核桃属的长山核桃同源蛋白遗传关系最近，与壳斗科栎属白栎次之，而与禾本科的黍稷和二穗短柄草的亲缘关系最远。JrWOX4b基因过表达植株的表型分析结果显示：JrWOX4b的过表达和对照植株生长发育均正常，但在相同培养条件下，JrWOX4b基因的过表达能够显著增加杨树的不定根数量，2周龄过表达植株不定根数量为对照植株的3 ～ 4倍，不定根长度是对照植株的1/2。 结论 从核桃中成功克隆了WOX基因家族成员JrWOX4b基因，其过表达可显著增加转基因植株的不定根数量。研究结果不仅能够为不定根发生调控机制的研究提供理论支撑，同时也为其他难生根木本植物的快速繁殖提供优良基因资源。

目的 建立2种早实核桃高效和稳定的体胚发生体系，为离体快繁技术及其基础研究提供技术和理论支撑，也为核桃遗传转化体系的构建奠定基础。 方法 分别以实生核桃‘林早香’和嫁接核桃‘中林6号’花后42~77 d的幼胚为试材进行离体培养，通过统计体胚诱导率，筛选体胚的最佳诱导时期；统计多次继代的体胚畸变率，并筛选最适ABA调节浓度；选取发育成熟的体胚进行饱和NH₄NO₃溶液脱水处理，分别处理0、24、48、72、96和120 h后统计失水量和转株率，探讨脱水程度对体胚植株再生的影响。 结果 外植体的发育时期对体胚发生至关重要，以‘林早香’和‘中林6号’幼胚为外植体进行体胚诱导，最佳诱导时期分别为花后约49 d和56 d，体胚诱导率分别为88.32%和86.67%。体胚经多次继代培养后产生较高畸变率，适量ABA处理不仅降低体胚畸变率，且提高体胚发生率，最佳ABA调节浓度为1.0 mg·L^-1。随着体胚脱水时间的延长，体胚失水量逐渐增加，植株再生率先升高后降低，脱水72 h时，‘林早香’和‘中林6号’的体胚萌发率达到最高，分别为56.67%和53.33%，此时失水量分别为38.73%和40.56%。 结论 早实核桃幼果发育过程中，合子胚的体胚发生率随着发育时期变化，适宜发育时期是提高体胚诱导发生的关键；适量ABA在体胚多次继代培养过程中对畸形胚起重要调节作用；适度的脱水处理对核桃体胚再生具有良好的促进作用。